关于印发医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行）的通知

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关于印发《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行)》的通知

联防联控机制医政〔2020〕271号

各省、自治区、直辖市及新疆生产建设兵团应建立COVID-19(领导小组和指挥部)肺炎疫情联合防控机制；

为指导各医疗机构做好新型冠状病毒核酸检测工作，我们组织制定了《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行)》(可从我委官方网站“医疗管理”栏目下载)。现印发给你们，请参照执行。

国务院对新型冠状病毒做出回应

医疗救治组疫情联合防控机制

2020年7月10日

(信息披露形式:主动披露)

医疗机构新型冠状病毒核酸检测手册

(审判)

为贯彻落实《关于做好COVID-19肺炎疫情规范化防控工作的指导意见》(郭健电[2020]14号)的要求，进一步规范新型冠状病毒(以下简称新型冠状病毒)核酸检测的技术人员、标本采集、标本管理、实验室检测和结果报告，确保检测质量，提高检测效率，满足新型冠状病毒核酸检测的需要，特制定本手册。本手册适用于所有对新型冠状病毒进行核酸检测的医疗机构。

一、技术人员的基本要求

(a)取样人员。从事新型冠状病毒核酸检测标本采集的技术人员应接受生物安全培训(合格培训)，熟悉标本种类和采集方法，掌握标本采集的操作程序和注意事项，并做好标本信息记录，确保标本质量符合要求，标本及相关信息可追溯。

(二)检测人员。实验室检测技术人员应具有大专以上学历或具有中级以上专业技术资格，并具有2年以上实验室工作经验和基因检测相关培训合格证。实验室工作人员应与试验项目和样品量相适应，以保证试验和报告结果的及时和熟练，并保证结果的准确性。

二、标本采集的基本要求

(一)基本原则。

1.各医疗机构的检测能力应与门急诊、住院等诊疗数量相匹配，并与采集的标本数量相适应，以避免因采集的标本数量明显超过检测能力而导致的标本积压、标本失败、检测结果反馈缓慢等问题。

2.医疗机构采集标本时，应根据不同的对象设置不同的采样区域，对发热患者和其他患者以及愿意尽力避免交叉感染的人进行采样。

3.标本采集应满足本机构发热门诊、住院病人、陪护人员和医院员工的检测要求，并进一步保证其他重点人群“应检测到最好”和一般人群“愿意检测到最好”的要求。

(2)采样点的设置。医疗机构在建立新型冠状病毒采样点时，应遵循安全、科学、方便的原则。采样点应为独立的空室，具备通风条件，分为相应的清洁区和污染区，并配备手卫生设施或装置。采样点应设置明显的导向标志，并明确采样过程和注意事项。设立独立的等候区，尽可能保证人员的单向流动，实行“1米”间隔要求，严格控制人员密度。

(3)人员配备和保护要求。每个采样点应配备1-2名采样人员。合理安排采样人员轮换，原则上每2-4小时轮换休息一次。采样人员防护装备要求:n95及以上防护面具、护目镜、防护服、乳胶手套和防水靴；如果接触病人的血液、体液、分泌物或排泄物，请戴双层乳胶手套；手套被污染时，及时更换外层乳胶手套。每个人都应该进行严格的手部消毒或更换手套。

(4)取样过程。医疗机构应当建立新型冠状病毒核酸检测和采样操作流程体系，并根据采样对象的类型确定具体的采样流程，包括预约、支付、核对信息、采样、检验、出具报告等。应通过条形码扫描和其他信息手段收集受试者的信息。标本采集前，采样人员应核对受检者的身份信息，并在公共区域以信息公告的形式告知核酸检测报告的发布时间和方法。每个标本至少应记录以下信息:1 .受试者(患者)的姓名、身份证号码、住址和联系方式；2 .采样单位名称、标本编号、标本采集日期、时间、采集地点、类型、数量等。

(5)收集方法。应采集呼吸道标本，包括上呼吸道标本(口咽拭子、鼻咽拭子等)。)或下呼吸道标本(呼吸道吸出物、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、深咳痰液等。)。其中，重症病例优先采集下呼吸道标本；根据临床需要，可以保留粪便样本。

1.口咽拭子。采集人员先用生理盐水漱口，取样器将药签浸入无菌生理盐水中(严禁将药签放入病毒保存液中，以免抗生素引起过敏)。被采集的人员微微仰着头，张开嘴，发出“啊”的声音，露出他们的双侧咽扁桃体，将拭子放在舌根上，在被采集的人的咽扁桃体两侧来回轻轻擦拭拭子至少3次，然后在咽后壁上下擦拭至少3次，并将拭子头浸入口腔中。

2.鼻咽拭子。采样器用一只手轻轻支撑被采集者的头部，用另一只手将拭子粘在鼻孔上，然后沿着下鼻道底部慢慢向后穿透。因为鼻道是弯曲的，不要使用太大的力量来避免外伤出血。当拭子顶部到达鼻咽腔后壁时，轻轻旋转一周(如有反射性咳嗽，停止一分钟)，然后慢慢取出拭子，将拭子头浸入含2 ~ 3毫升病毒保存液的试管中。

3.深层祛痰溶液。要求患者深深咳嗽，然后将咳痰收集在一个装有3毫升采样溶液的50毫升螺旋塑料管中。如果样品溶液中未收集到痰，可在检测前加入2 ~ 3毫升样品溶液或与痰量相同的痰消化溶液。含1g/l蛋白酶K的磷酸盐缓冲液可使痰液化，其体积与痰相同。

4.鼻咽或呼吸道提取物。使用连接有负压泵的收集器从鼻咽抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。将收集头插入鼻腔或气管，打开负压，旋转收集头并慢慢抽出，收集抽取的粘液，用3毫升采样溶液清洗收集头一次(或用50毫升注射器代替收集头连接儿童导管)。

5.支气管灌洗液。将收集头从鼻孔或气管插口插入气管(约30cm深)，注入5ml生理盐水，打开负压，旋转收集头，慢慢收回。收集提取的粘液，用采样溶液冲洗收集器一次(或将儿科导管连接到50毫升注射器上，而不是收集)。

6.肺泡灌洗液。局部麻醉后，经口或鼻将纤维支气管镜插入右肺中叶分支或左肺舌段，尖端插入支气管分支开口。然后通过气管活检孔慢慢加入无菌生理盐水，每次30 ~ 50毫升，总量为100 ~ 250毫升，且不应超过30 ~ 50毫升。

三、标本管理的基本要求

(a)样品包装。所有标本应放在带螺帽和垫圈的防冻标本收集管中，并拧紧。样品编号、类型、名称和取样日期应在容器外面标明。将密封的样本密封在合适尺寸的塑料袋中，每个塑料袋中一个样本。

(二)标本检验。样品应在收集后2-4小时内送到实验室，并在室温下放置不超过4小时。标本长途运输时，应采用干冰等冷藏方式保存，并严格按照相关规定进行包装和运输。

(3)标本接收。标本接收人员的个人防护应根据取样人员的防护装备进行。标本运送人员和接收人员应对标本进行双重签名。

(4)标本保存。用于病毒分离和核酸检测的样品应尽快检测，可在24小时内检测的样品可保存在4℃；24小时内检测不到的样品应储存在-70℃或以下(如果在-70℃没有储存条件，则应暂时储存在-20℃的冰箱中)。应设立一个专门的图书馆或柜台来分别存放标本。避免在样品运输过程中反复冷冻和解冻。

(五)混合样品的采集和检测。

1.取样方法。根据本手册中的“第二部分(5)收集方法”收集样品。

2.样品混合。几个采集的样品(原则上不超过5个)应充分混合，每个200微升，以形成待检测的混合样品。

3.混合样本的结果判断和重测。根据各检测试剂盒说明书的要求，对检测到的基因位点逐一进行判断，任何阳性位点或ct值的混合样本均可作为复检对象，单样本核酸检测按常规方法进行。

四、实验室管理的基本要求

(a)实验室资格要求。开展核酸检测的实验室应符合《病原微生物实验室生物安全管理条例》(国务院令第424号)和《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》(卫办郑怡发[2010]194号)的相关规定，具备卫生行政部门审核备案的生物安全二级及以上实验室条件和临床基因扩增实验室条件。独立医学实验室还应符合《医学实验室基本标准(试行)》和《医学实验室管理标准(试行)》的要求。

(二)实验室分区要求。原则上，进行新型冠状病毒核酸检测的实验室应设立以下区域:试剂储存和制备区、标本制备区、扩增和产物分析区。在物理空中，这三个区域应该完全相互独立，并且不能与空.直接通信每个区的职能是:

1.试剂储存和制备区:储存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合物的制备，以及消耗品如离心管和吸管的储存和制备。

2.样品制备区:转移桶的开启、样品的灭活、核酸的提取及其加入扩增反应管等。

3.扩增和产品分析领域:核酸扩增和产品分析。

根据所用仪器的功能，这些区域可以适当组合。如果采用集标本处理、核酸提取和扩增检测于一体的自动分析仪，标本制备区、扩增区和产物分析区可以合并。

(3)主要仪器设备。实验室应配备适合进行检验项目的仪器设备，包括核酸提取器、医用pcr放大器、生物安全柜、病毒灭活设备(如水浴锅等)。)，用于储存试剂和标本的冰箱和冰柜，离心机，不间断电源(ups)或备用电源等。

(4)实验室测试。收到样品后，实验室应检查生物安全柜中的样品并灭活样品。根据标准操作程序进行试剂制备、样品预处理、核酸提取、核酸扩增、结果分析和报告。实验室应建立可疑标本和阳性标本的复检流程。

1.试剂制备。应选择国家药品监督管理局批准的试剂，在选择标本保存液和核酸提取试剂时，应使用试剂盒说明书中建议的支持试剂。核酸提取方法与标本保存液和灭活方式有关。一些核酸提取试剂(如磁珠法或一步法)易受胍盐或保存液中特殊成分的影响。特别是，一步提取需要试剂制造商提供的样品保存溶液。

2.标本的预处理。使用含胍盐的灭活标本保存液的实验室可以直接提取核酸，无需灭活处理。使用非灭活标本保存液的实验室可在56℃下温育30分钟，进行热灭活和化学灭活。

3.核酸提取。取出灭活的标本，打开生物安全柜中的标本收集管添加标本。核酸提取后，立即密封提取物。将提取核酸加入生物安全柜中的pcr扩增反应系统中。

4.核酸扩增。将扩增系统放入放大器，检查扩增程序是否与试剂说明书一致，启动扩增程序。将扩增产物放入含1 mol/l盐酸中，将所有产物浸泡在液体中，然后将扩增产物移出实验室。

五、实验室质量控制和管理

医疗机构应当加强核酸检测的质量控制。实验室应验证检测系统的必要性能，性能指标包括但不限于精度和最低检测限。实验室应做好日常室内质量控制工作，按照《国家卫生计生委办公厅关于医疗机构新型冠状病毒核酸检测相关要求的通知》(国卫办韩毅[2020]53号)进行室内质量控制。我们应该正常接受国家或省级检验质量控制。如果您没有按照当地要求参与间质评，或者间质评结果不合格，或者检测结果质量突出，您不得进行核酸检测。

质量管理包括人员的操作技能和生物安全培训、标本采集、运输、接收和保存、耗材管理、试剂选择和性能验证、质控品的合理设置和有效判断、复检规则、报告、结果说明和建议等。

六、核酸检测结果反馈的基本要求

(一)报告时限。对于发热门诊和急诊患者，在6小时内报告核酸检测结果；对于普通门诊病人、住院病人和陪护人员，原则上应在12小时内报告结果；对于那些愿意尽最大努力的人，结果通常在24小时内报告。医疗机构应当为受试者出具检验报告，告知其查询方法，不得以任何理由出具检验报告。

(二)检测报告。各医疗机构应根据新型冠状病毒核酸检测报告的参考样式出具检测报告(见附件)，并根据卫生行政部门的规定相互认可检测结果。医疗机构可以利用纸质、快递、网络或信息系统发布核酸检测报告，并注意保护个人隐私。当发现核酸检测呈阳性结果时，应按有关要求报告传染病，并在12小时内进行后续流行病学调查。

七、核酸检测安全管理

(一)标本安全管理。关闭标本转移盒前，应喷洒75%酒精或0.2%含氯消毒剂进行消毒。样品的包装应符合国际民航组织文件doc9284“危险goods/きだ0/安全运输航行技术规则”中pi602分类包装的要求。如果是外部标本运输，应按照甲类感染性物质分三层包装。疑似或确诊的患者标本应标有特殊标记，并单独运输。如果检测结果为阴性，剩余的样品和核酸可在结果报告发出后24小时内装入专用密封废物转移袋进行压力蒸汽灭菌处理，然后与其他医疗废物一起运出实验室进行销毁处理；如果测试结果为阳性，应重新检查和测试剩余的样品。

(二)实验室检测安全管理。

1.基本要求。标本的灭活和检测应在生物安全二级实验室进行，生物安全三级实验室应采取个人防护措施。进行新型冠状病毒核酸检测的实验室应制定实验室生物安全相关程序和处理实验室生物安全操作错误或事故的程序，并建立实验室环境消毒处理记录。

2.实验前的安全要求。应使用0.2%氯消毒剂或75%酒精对桌面、桌面和地板进行消毒。消毒剂应每天新鲜配制，时间不超过24小时。转移到实验室的标本转移桶应在生物安全柜中打开。打开转移桶后，用0.2%的氯消毒剂或75%的酒精对转移桶内壁和标本采集密封袋进行喷雾消毒。取出标本采集管后，首先检查标本管外壁是否损坏，管口是否泄漏或有无壁渣。确认无泄漏后，建议用0.2%的氯消毒剂喷洒和擦拭消毒样本管的外表面(这里不建议使用75%的酒精，以免损坏样本标识)。如发现泄漏，应立即用吸水纸覆盖，并喷洒有效氯含量为0.55%的含氯消毒剂进行消毒处理，不得对标本进行连续检测。标本制作不合格记录后，应立即密封包装，加压蒸汽灭菌后销毁。

实验室操作人员应在温水浴前拧紧标本采集管的盖子，必要时用密封膜密封盖子。在温水浴中，可每10分钟轻轻摇动样品一次，以确保样品均匀灭活；温水浴后，应允许样品静置至室温或至少10分钟以沉淀气溶胶，然后应打开盖子进行后续核酸提取。

3.核酸提取和检测的安全要求。样本的核酸提取和检测应尽可能在生物安全柜中进行。为了打开样本管套或其他可能产生气溶胶的操作，必须在生物安全柜中进行。

4.实验后的安全要求。实验室环境应该清洁和消毒。

(1)实验室空空气消毒。每次实验室测试后，房间应进行30分钟的紫外线消毒或1小时的紫外线消毒器照射。必要时，可使用核酸清除剂等试剂来去除实验室中的残留核酸。

(2)工作面消毒。每天实验结束后，用0.2%的氯消毒剂或75%的酒精对台面和地板进行消毒。

(3)生物安全柜的消毒。实验使用后，将消耗性废物放入医疗废物垃圾袋中，然后在外表面喷洒含有效氯的0.2%消毒剂或75%酒精进行消毒。手消毒后，将垃圾袋从生物安全柜中取出，放入实验室废物转移袋中。擦拭试管架、实验室工作台、移液器等。含75%酒精。然后关闭生物安全柜，用紫外线灯消毒30分钟。

(4)运输容器的消毒。在使用运输和储存标本的容器之前和之后，应使用0.2%的氯消毒剂或75%的酒精进行擦拭或喷雾消毒。

(5)塑料或有机玻璃材料的消毒:用0.2%氯消毒剂或过氧乙酸或过氧化氢擦拭或喷雾消毒。

(3)实验室医疗废物管理。

1.基本要求。进行新型冠状病毒核酸检测的实验室应制定医疗废物处理程序以及污水和污水处理的操作程序。所有危险医疗废物必须完全贴上标签，并符合统一和标准化的容器和标签方法。经过适当培训的人员应使用适当的个人防护设备和器材来处理危险的医疗废物。实验室应建立医疗废物处理记录，定期取用和更换实验室废气的高效空气过滤器，定期监测处理后的污水，并使用生物指示剂监测压力灭菌效果。

2.医疗废物的处理措施。医疗废物的处理是控制实验室安全的关键环节，因此有必要充分掌握生物安全废物的分类，并严格执行相应的处理程序。

(1)废液处理。实验室产生的废液可分为普通污水和感染性废液。普通污水产生于洗手盆等设备，此类污水应排入实验室水处理系统，经统一处理达标后排放。感染性废液，即实验操作过程中产生的废液，应进行化学消毒(0.55%含氯消毒剂)或物理消毒(紫外线照射30分钟以上)。经彻底消毒、灭活后，方可排入实验室水处理系统，经统一处理达标后方可排放。污水消毒处理效果应按照gb18466《医疗机构水污染物排放标准》的相关规定进行评价。

(2)固体废物的处理。实验室固体废物应分类收集。固体废物收集容器应具有不易破碎、防渗漏、防潮耐热、密封等特点。实验室内潜在的传染性废物不允许堆放和储存，应及时用压力蒸汽灭菌。废物处置前，应存放在实验室指定的安全地方。测试耗材、个人防护用品等小型固体废物需要用双层防漏专用包装袋包装密封，然后用压力蒸汽灭菌，然后沿医疗废物通道运出实验室。

体积较大的固体废物，如高效空气过滤器，应由专业人员就地消毒，然后放入安全的容器中进行消毒和灭菌。不能用压力蒸汽消毒的物品，如电子设备，可以用环氧乙烷熏蒸。消毒灭菌后从实验室清除的固体废物应集中交由医疗废物处理单位处置。

(4)实验室污染的处理。

1.当标本污染生物安全柜的手术台并造成有限污染时:立即用吸水纸覆盖并喷洒0.55%含氯消毒剂。目前应准备消毒剂，并在24小时内使用。

2.当样本倾覆并造成实验室污染时:保持实验室空室关闭，以避免污染物扩散。立即用蘸有0.55%氯消毒剂的毛巾覆盖污染区域。必要时(如大量溢出)，可使用剂量为2g/m3的过氧乙酸熏蒸实验室，并熏蒸过夜。或用喷雾器喷洒20克/升过氧乙酸消毒剂，剂量为8毫升/立方米，作用时间为1-2小时；必要时，用高锰酸钾-甲醛熏蒸:将高锰酸钾8g/m3放入耐热耐腐蚀容器(陶罐或玻璃容器)中，然后加入甲醛(40%)10ml/m3，熏蒸4小时以上。熏蒸期间室内湿度为60%-80%。

3.清理污染物时，严格遵循活病毒生物安全操作要求，采用压力蒸汽灭菌处理，进行实验室通风等。，以防止二次危害。

八、核酸检测信息管理

医疗机构应当在卫生行政部门的统筹规划下，做好标本采集、核酸检测和检验报告的信息对接工作。建立统一的信息采集和代码扫描程序，信息至少应包括姓名、性别、年龄、身份证号和联系电话，使标本采集的个人信息能够顺利与医疗机构的信息系统连接，实现医疗机构之间的信息交流、相互获取和相互认可。

九.其他要求

由于疫情防控等因素的需要，如果医疗机构采集的样本量明显超出自身检测能力范围，可以建立医疗机构间新型冠状病毒核酸检测的合作机制，分散检测压力，确保及时性和有效性。

附加

填写表格的说明:

1.人员类型包括发热门诊、普通门诊、急诊科、住院患者、陪护人员、我院员工、院外采样人员、其他机构检查人员等。

2.发热门诊、普通门诊、急诊科和住院部的患者应填写身份证号码、住院号、病房/床位号、提交科室和申请医生。

[我想纠正错误]负责编辑:严松

来源：新浪直播网